大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化過程所用的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變體（Rˉ,Mˉ），它可以容忍外源DNA分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如電擊法，CaCl2，RbCl（KCl）等化學(xué)試劑法）的處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時(shí)性的改變，成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞 （Compenent cells）。進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制，表達(dá)實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。將經(jīng)過轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即可篩選出轉(zhuǎn)化子（Transformant，即帶有異源DNA分子的受體細(xì)胞 ）。目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法有CaCl2和RbCl（KCl）法，RbCl（KCl）法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較高，但CaCl2法簡(jiǎn)便易行，且其轉(zhuǎn)化效率*可以滿足一般實(shí)驗(yàn)的要求，制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí)，可加入占總體積15％的無(wú)菌甘油于-70℃保存（半年），因此CaCl2法為使用更廣泛。
大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化