ELISA實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)抗體的方法

1、雙抗原夾心法，原理和步驟與雙抗體夾心一樣的，用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。與間接法相比，具有靈敏度和特異性，但不是很常用，因?yàn)榫湍壳暗募夹g(shù)條件，想得到能用于ELISA檢測(cè)的純化抗原還是有一定的難度。臨床上常用于檢測(cè)HIV抗體初篩，TP抗體和抗HBS抗體等，這些檢測(cè)對(duì)特異性和靈敏度，準(zhǔn)確性都要求特別高。

2、間接法，這個(gè)是檢測(cè)抗體的方法。操作步驟與雙抗體夾心法一樣，只是包被是純化的相應(yīng)抗原而不是抗體了，加入樣品后洗滌，再加入的酶標(biāo)記抗抗體，然后顯色，顏色深淺與樣品中待測(cè)抗體的濃度正相關(guān)。間接法也有一些自己的特點(diǎn)，一個(gè)就是酶標(biāo)抗體可選擇性檢測(cè)抗體的亞型，可用于鑒別感染時(shí)期，如果是IGM，那么提示感染早期；另一個(gè)就是酶標(biāo)抗體檢測(cè)抗體特異性不高，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，可出現(xiàn)全板陽(yáng)性，挺嚇人的。臨床上常用該方法檢測(cè)抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙眼衣原體抗體等等。

3、競(jìng)爭(zhēng)法，和檢測(cè)抗原設(shè)計(jì)的競(jìng)爭(zhēng)法一致，臨床上用的不多，以下總結(jié)了一下兩個(gè)很具有代表性的：

（1）抗HBC抗體，檢測(cè)方法與抗原相同，包被抗原之后，分兩組，一組加入預(yù)先混勻的酶標(biāo)抗體和待測(cè)樣品，一組只加入酶標(biāo)抗體，兩組的顯色之差可代表待測(cè)抗體的相對(duì)含量，需注意的是待測(cè)抗體與酶標(biāo)抗體是同一物質(zhì)。

（2）抗HBe抗體檢測(cè)，方法與抗原競(jìng)爭(zhēng)法設(shè)計(jì)稍有區(qū)別，包被的抗HBE抗體后，檢測(cè)也分兩組，一組先加入酶標(biāo)HBeAGg再立即加入待測(cè)樣品，一組只加酶標(biāo)HBEAG，兩組顯色之差代表待測(cè)抗體的相對(duì)含量，這種設(shè)計(jì)中包被抗體和待測(cè)抗體是同一物質(zhì)。值得注意的是混合組不是事先混勻再加入，而是先加入待測(cè)抗體后再加入酶標(biāo)抗原。

4、捕獲法，這種方法比較少用，由于具有識(shí)別抗體類型的優(yōu)點(diǎn)，僅用于需要早期診斷的急性感染或者具有爆發(fā)性感染的疾病，如HAV-IgM、HBc-IgM、ToRCH等等。具體方法是先包被能識(shí)別抗體類別的抗體，洗滌后加樣品，再洗滌，加酶標(biāo)記抗原，洗滌后顯色。
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