研域生物分析酶聯(lián)免疫試劑盒屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。

如果對(duì)試劑準(zhǔn)備不太注意，在實(shí)驗(yàn)時(shí)將酶聯(lián)免疫分析試劑盒從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題影響后面的操作。測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的是，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后。

1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。

5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定。

6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，ELISA試劑盒不能混淆。

7. 底物請(qǐng)避光保存。

8.控制好每一步的操作時(shí)間。

在使用前與室溫平衡，再進(jìn)行測(cè)定。在酶聯(lián)免疫試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在酶聯(lián)免疫試劑盒中似不恰當(dāng)。